NGDx 2023 下一代先进诊断技术开发与应用

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NGDx 2023 下一代先进诊断技术开发与应用
NGDx 2023第九届下一代先进诊断技术开发与应用论坛将在上海升级起航。

如何利用Feyond-A400进行TRFIA检测
1.癌胚抗原的由来

癌胚抗原( Carcinoembryonic antigen,CEA)是一种分子量为150,000-300,000道尔顿的糖蛋白。1965年首先由加拿大学者从结肠腺瘤和胎儿肠中提取的一种肿瘤相关抗原。主要存在于直肠，结肠癌组织和胚胎肠粘膜上。因这种抗原也存在于2～6个月胚胎的胃肠、肝脏和胰腺组织中，故名癌胚抗原，也称胚胎抗原（EA）或胎儿抗原（FA）[1]。

2.癌胚抗原的临床意义

人体血清中的CEA属于广谱肿瘤标志物，其浓度与各脏器癌特别是结肠癌密切相关，凡内胚层来源的恶性肿瘤如结肠、直肠、食道、胃、肝和胰腺等的癌肿瘤病人血清中均有CEA存在, 并含量明显高于非肿瘤病人[2]。肿瘤患者血清CEA水平与肿瘤的进展相关，追踪测定CEA有助于肿瘤术后观察和对手术成败的判断。

3.癌胚抗原的检测技术

用于检测 CEA的方法已有酶联免疫分析法（ELISA）、放射免疫分析法（RIA）、化学发光免疫分析法（CLIA）、电化学发光免疫分析法（ECLIA）和时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）。TRFIA是20世纪80年代迅速发展起来的一种公认最有前途的非放射性免疫标记技术[3]，TRFIA具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、测定范围宽和非放射性等优点。

奥盛Feyond-A400多功能酶标仪是在Feyond-A300的基础上新增TRF检测功能，可实现对TRFIA类实验的检测。

4.材料

癌胚抗原测定试剂盒（广州达瑞）

Feyond-A400多功能酶标仪

5.方法

标品配方

配制CEA标准品，浓度分别为 1、5、10、100、560 ng/mL。

仪器参数设置

试剂波长

EX/EM：365/612

PMT增益

中高

稳定时间

150ms

积分时间

40μs

TRF延迟

100μs

图1. 基本参数设置

 

6.结果

分析参数

曲线拟合方式

样条函数

X轴

LOG

Y轴

LOG-B

 

Feyond-A400内置的数据处理软件可直接将CEA标准品浓度与荧光强度进行标准曲线拟合，利用三次样条拟合方式得出曲线。

     图2. 仪器生成的CEA标准曲线

 

根据获得的标准曲线反算标准品浓度，与理论偏差可在4%以内。

  图3. 标品反算浓度

 

与通常的荧光免疫分析法相比，TRFIA可有效避免本底荧光的干扰，大大提高检测的灵敏度和准确性，已广泛应用于医学、食品检测、和兽药残留检测等领域。而Feyond-A400的TRF检测功能可实现TRFIA相关应用的检测。

 

Feyond-A400详情