摘 要

本发明公开了一种高效的单细胞空间位置和遗传信息共分析的建库方法及其应用，包括步骤：S10、提供具有位置标签序列的空间芯片；S20、将待测的组织切片与具有位置标签序列的空间芯片结合，以使得位置标签序列结合到待分析的组织切片的细胞核中，回收含有位置标签序列的细胞核；S30、提供多重逆转录标签引物，将多重逆转录标签引物与所述细胞核混合进行逆转录、细胞标记，得包含细胞标签的液滴；S40、将包含细胞标签的液滴破乳并解交联，进行测序，得待测组织切片中单细胞的位置信息及对应的单细胞转录组信息。本方法以超高通量在单细胞水平上分析遗传信息，还能够有效去除来源于组织碎片的干扰，得到精准的单细胞空间位置信息。

背景技术

众所周知复杂的生命机体由许多性质特异的细胞组成，在特定组织的特定位置每个细胞表达的核酸的种类与数量都有所不同，所以在单细胞水平上能够同时检测单细胞所在组织空间位置和单细胞RNA表达水平的分析技术具有重大科研意义和商业价值。

目前，可以在不同空间分辨率上实现真正的单细胞转录组和空间位置联合分析，这类技术的共同点是首先对组织切片的细胞核进行空间位置标记，然后再通过解离或者抽核制备偶联有位置标记的单细胞核悬液。由于不同组织中细胞的分布和密度不同，来源于不同组织的单张10-30μm厚度的切片通常可以制备到2-30万个单细胞核，而且单细胞核悬液中往往具有大量组织碎片，由此带来了两个问题：1.为了尽可能的得到更精细的组织空间结构，我们需要将制备得到的所有细胞核用于单细胞分析，然而现有的高通量单细胞处理通量是每次反应只能分析1~2万细胞，那么需要对应15次以上的单细胞建库试剂耗材才能处理30万细胞，这极大的增加了建库试剂和人力运营成本； 2.这些来源于组织的大量碎片无法通过常规的密度梯度离心去除，但在切片处理过程中也和细胞核一样会结合空间位置标签，如果来源于不同位置的碎片和细胞核被同一个细胞标签标记，例如被包裹进同一个液滴内被同一个水凝胶标签微珠标记，那么会影响真正细胞核的位置判定，因此，亟需一种更准确识别空间位置信息的建库方法。