摘 要

本发明公开了稳定的冠状病毒重组蛋白二聚体及其表达载体，冠状病毒重组蛋白，由冠状病毒S蛋白S?RBD、冠状病毒N蛋白的CTD区N?CTD和将二者偶联的连接子构成。本发明一些实例的冠状病毒重组蛋白，可以形成并维持稳定的二聚体结构，避免单体S?RBD降解，有利于提高冠状病毒重组蛋白的免疫原性，有望用于制备检测试剂原料、疫苗、抗体、预防或治疗性药物。本发明一些实例的冠状病毒重组蛋白二聚体，具有很好的免疫原性。在疫苗开发领域具有广阔的应用前景。本发明一些实例的表达载体，易于表达冠状病毒重组蛋白二聚体且表达量高。 

背景技术

冠状病毒属于套式病毒目（Nidovirales）、冠状病毒科（Coronaviridae）、冠状病毒属（Coronavirus），是许多家畜、宠物包括人类疾病的重要病原，引起多种急慢性疾病。根据系统发育树，冠状病毒可分为四个属：α、β、γ、δ，其中β属冠状病毒又可分为四个独立的亚群A、B、C和D群。

冠状病毒感染在世界各地极为普遍。到目前为止，大约有15种不同冠状病毒株被发现，能够感染多种哺乳动物和鸟类，有些可使人发病。除了近期爆发的新型冠状病毒SARS-CoV-2，还有HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV等六种冠状病毒可以感染人类，其中SARS-CoV和MERS-CoV感染后比较严重，分别引发重症急性呼吸综合征和中东呼吸综合征。

冠状病毒是最大单股正链 RNA 病毒，基因组大小约为30 kbp，其主要结构蛋白包含核衣壳蛋白（N）、纤突糖Spike蛋白（S）、跨膜蛋白（M）和小膜蛋白（E）。其中S蛋白参与病毒与细胞受体结合、介导病毒与宿主膜融合，同时S蛋白及其受体结构域S-RBD主要负责诱导宿主免疫反应和病毒中和抗体，是疫苗设计的关键抗原位点。然而将S-RBD单体作为抗原时，免疫原性偏弱且蛋白稳定性较差。如何提高S-RBD的稳定性，具有非常重要的意义。